透明細胞癌(clearcellrenalcellcarcinoma，CCRCC)是腎臟惡性腫瘤的一種常見的類型，其占全身惡性腫瘤的2%-3%，miRNA(microRNA)是一類具有調(diào)控基因表達功能的小分子,新近的臨床研究表明大量miRNA能有效抑制腫瘤或者促使腫瘤發(fā)生和發(fā)展的潛能。這預示著研究miRNA信使分子能在人類腫瘤診斷治療中發(fā)揮重要的作用，為了深入認識腎透明細胞癌起源的具體的發(fā)病機制，本文研究了miRNA在腎透明細胞癌組織中的表達調(diào)控情況，從而進一步探討miR-143和miR-1256在腎透明細胞癌中的調(diào)控表達作用。
1資料與方法
1.1一般資料
收集我院自2003年1月至2010年10月期間的36例原發(fā)性散發(fā)腎透明細胞癌的手術(shù)時切除的標本，其中男患者20例，女16例，年齡都在31-80歲，平均年齡在55.6歲。左側(cè)24例例，右側(cè)12例。所有腫瘤標本都經(jīng)過組織病理學證實確實為腎透明細胞癌。所有病例在手術(shù)前都未作任何放療、化療治療。對照標本則由36例遠離腫瘤的癌周圍的腎臟組織。
1.2組織的提取
取腎透明細胞癌組織和正常腎組織標本采用Trizol法進行提取組織總剛A，通過異丙醇沉淀濃縮以及分光光度計測定濃度、瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA的質(zhì)量問。將提取的總RNA標本進行miRNA表達譜芯片分析。
1.3Real-timePCR分析
cDNA合成以lOng總的RNA為轉(zhuǎn)錄模板使用miR143和miR-1256特異性逆轉(zhuǎn)錄引物使其發(fā)生逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反應(yīng)條件為16°C，30min和42°C，30min、85°C，5min，采用SYBRGreen法進行試劑熒光定量PCR儀進行檢測，實驗重復3次確定CT值。
1.2方法
1.3統(tǒng)計學方法
本次研究所得數(shù)據(jù)采用SPSSl1.0軟件包進行統(tǒng)計學分析，根據(jù)實驗需要采用NOVA檢驗，以P<0.05為具有統(tǒng)計學意義。
2結(jié)果
miRNA表達譜芯片、NorthenblotReal-timeCR法進行檢查，研究結(jié)果提示miR-143和miR-1256兩基因在腎透明細胞癌中較正常的腎細胞組織相比知在腎透明細胞癌中明顯低表達。miRNA表達譜芯片顯示miR-143和miR-1256在腎透明細胞癌組織中比正常腎細胞組織表達低很多，二者表達差異的倍數(shù)分別是13.9和16.1倍。而Real-timePCR法顯示miR-143在腎透明細胞癌組織中的表達為(16.01土8.90)相比正常的腎細胞組織317.79±124.65這一數(shù)據(jù)明顯低很多，二者表達差異具有顯著性差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，miR-1256在腎透明細胞癌組織中的表達數(shù)據(jù)為(1.29士0.83)較正常腎細胞組織(8到士5.81)也低很多，同樣具有統(tǒng)計學意義，P<0.05。
3討論
3.1腎透明細胞癌(clearcellrenalcellcarcinoma，CCRCC)是腎臟惡性腫瘤的一種常見的類型，其占全身惡性腫瘤的2%-3%。miRNA是指一個短的核糖核酸(RNA)分子。一般在真核細胞中一個microRNA分子和其他分子RNA相比，核昔酸數(shù)較少(平均22)。m剛A作用是綁定到目標信使剛A轉(zhuǎn)錄(mRNA的)上的互補序列的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)，通常在翻譯抑制或目標退化和基因沉默
3.2結(jié)果分析
本次研究結(jié)果顯示miRNA表達譜芯片、NorthenblotReal-timeCR法進行檢查，研究結(jié)果提示miR-143和miR-1256兩基因在腎透明細胞癌中較正常的腎細胞組織相比知在腎透明細胞癌中明顯低表達.miRNA表達譜芯片顯示miR-143和miR-1256在腎透明細胞癌組織中比正常腎細胞組織表達低很多，二者表達差異的倍數(shù)分別是13.9和16.1倍。而Real-timePCR法顯示miR-143在腎透明細胞癌組織中的表達為(16.01士8.90)相比正常的腎細胞組織(317.79土124.65)這一數(shù)據(jù)明顯低很多，二者表達差異具有顯著性差異具有統(tǒng)計學意義，(P<0.05)，miR-1256在腎透明細胞癌組織中的表達數(shù)據(jù)為(1.29士0.83)較正常腎細胞組織(8.95±5.81)也低很多，同樣具有統(tǒng)計學意義，P<0.05。
顯然本研究通過多種檢測方法都證實了miR-143miR-1256在腎透明細胞癌組織中明顯下調(diào)表達且它們的低表達可能在不同臨床腫瘤分期、分級中并無顯著性差異。miR-143和miR-1256基因在腫瘤細胞中的下調(diào)表達是否與腫瘤的其它臨床病理有關(guān)以及它們能否作為小分子陽A藥物治療腎透明細胞癌是我們后續(xù)研究的重點。
3.3結(jié)論
綜上所述，miR-1256和miRI43基因的表達情況研究能對腎透明細胞癌的發(fā)生和發(fā)展有重要臨床指導意義
